src/jalview/ext/ensembl/EnsemblSeqProxy.java

   1 /*
   2  * Jalview - A Sequence Alignment Editor and Viewer ($$Version-Rel$$)
   3  * Copyright (C) $$Year-Rel$$ The Jalview Authors
   4  *
   5  * This file is part of Jalview.
   6  *
   7  * Jalview is free software: you can redistribute it and/or
   8  * modify it under the terms of the GNU General Public License
   9  * as published by the Free Software Foundation, either version 3
  10  * of the License, or (at your option) any later version.
  11  *
  12  * Jalview is distributed in the hope that it will be useful, but
  13  * WITHOUT ANY WARRANTY; without even the implied warranty
  14  * of MERCHANTABILITY or FITNESS FOR A PARTICULAR
  15  * PURPOSE.  See the GNU General Public License for more details.
  16  *
  17  * You should have received a copy of the GNU General Public License
  18  * along with Jalview.  If not, see <http://www.gnu.org/licenses/>.
  19  * The Jalview Authors are detailed in the 'AUTHORS' file.
  20  */
  21 package jalview.ext.ensembl;
  22
  23 import java.io.IOException;
  24 import java.net.MalformedURLException;
  25 import java.net.URL;
  26 import java.util.ArrayList;
  27 import java.util.Arrays;
  28 import java.util.Collections;
  29 import java.util.List;
  30 import java.util.Map;
  31
  32 import org.json.simple.parser.ParseException;
  33
  34 import jalview.analysis.AlignmentUtils;
  35 import jalview.analysis.Dna;
  36 import jalview.bin.Console;
  37 import jalview.datamodel.Alignment;
  38 import jalview.datamodel.AlignmentI;
  39 import jalview.datamodel.DBRefEntry;
  40 import jalview.datamodel.DBRefSource;
  41 import jalview.datamodel.Mapping;
  42 import jalview.datamodel.Sequence;
  43 import jalview.datamodel.SequenceFeature;
  44 import jalview.datamodel.SequenceI;
  45 import jalview.datamodel.features.SequenceFeatures;
  46 import jalview.exceptions.JalviewException;
  47 import jalview.io.gff.Gff3Helper;
  48 import jalview.io.gff.SequenceOntologyFactory;
  49 import jalview.io.gff.SequenceOntologyI;
  50 import jalview.util.Comparison;
  51 import jalview.util.DBRefUtils;
  52 import jalview.util.IntRangeComparator;
  53 import jalview.util.MapList;
  54
  55 /**
  56  * Base class for Ensembl sequence fetchers
  57  *
  58  * @see http://rest.ensembl.org/documentation/info/sequence_id
  59  * @author gmcarstairs
  60  */
  61 public abstract class EnsemblSeqProxy extends EnsemblRestClient
  62 {
  63   protected static final String DESCRIPTION = "description";
  64
  65   /*
  66    * enum for 'type' parameter to the /sequence REST service
  67    */
  68   public enum EnsemblSeqType
  69   {
  70     /**
  71      * type=genomic to fetch full dna including introns
  72      */
  73     GENOMIC("genomic"),
  74
  75     /**
  76      * type=cdna to fetch coding dna including UTRs
  77      */
  78     CDNA("cdna"),
  79
  80     /**
  81      * type=cds to fetch coding dna excluding UTRs
  82      */
  83     CDS("cds"),
  84
  85     /**
  86      * type=protein to fetch peptide product sequence
  87      */
  88     PROTEIN("protein");
  89
  90     /*
  91      * the value of the 'type' parameter to fetch this version of
  92      * an Ensembl sequence
  93      */
  94     private String type;
  95
  96     EnsemblSeqType(String t)
  97     {
  98       type = t;
  99     }
 100
 101     public String getType()
 102     {
 103       return type;
 104     }
 105
 106   }
 107
 108   /**
 109    * Default constructor (to use rest.ensembl.org)
 110    */
 111   public EnsemblSeqProxy()
 112   {
 113     super();
 114   }
 115
 116   /**
 117    * Constructor given the target domain to fetch data from
 118    */
 119   public EnsemblSeqProxy(String d)
 120   {
 121     super(d);
 122   }
 123
 124   /**
 125    * Makes the sequence queries to Ensembl's REST service and returns an
 126    * alignment consisting of the returned sequences.
 127    */
 128   @Override
 129   public AlignmentI getSequenceRecords(String query) throws Exception
 130   {
 131     // TODO use a String... query vararg instead?
 132
 133     // danger: accession separator used as a regex here, a string elsewhere
 134     // in this case it is ok (it is just a space), but (e.g.) '\' would not be
 135     List<String> allIds = Arrays
 136             .asList(query.split(getAccessionSeparator()));
 137     AlignmentI alignment = null;
 138     inProgress = true;
 139
 140     /*
 141      * execute queries, if necessary in batches of the
 142      * maximum allowed number of ids
 143      */
 144     int maxQueryCount = getMaximumQueryCount();
 145     for (int v = 0, vSize = allIds.size(); v < vSize; v += maxQueryCount)
 146     {
 147       int p = Math.min(vSize, v + maxQueryCount);
 148       List<String> ids = allIds.subList(v, p);
 149       try
 150       {
 151         alignment = fetchSequences(ids, alignment);
 152       } catch (Throwable r)
 153       {
 154         inProgress = false;
 155         String msg = "Aborting ID retrieval after " + v
 156                 + " chunks. Unexpected problem (" + r.getLocalizedMessage()
 157                 + ")";
 158         System.err.println(msg);
 159         r.printStackTrace();
 160         break;
 161       }
 162     }
 163
 164     if (alignment == null)
 165     {
 166       return null;
 167     }
 168
 169     /*
 170      * fetch and transfer genomic sequence features,
 171      * fetch protein product and add as cross-reference
 172      */
 173     for (int i = 0, n = allIds.size(); i < n; i++)
 174     {
 175       addFeaturesAndProduct(allIds.get(i), alignment);
 176     }
 177
 178     List<SequenceI> seqs = alignment.getSequences();
 179     for (int i = 0, n = seqs.size(); i < n; i++)
 180     {
 181       getCrossReferences(seqs.get(i));
 182     }
 183
 184     return alignment;
 185   }
 186
 187   /**
 188    * Fetches Ensembl features using the /overlap REST endpoint, and adds them to
 189    * the sequence in the alignment. Also fetches the protein product, maps it
 190    * from the CDS features of the sequence, and saves it as a cross-reference of
 191    * the dna sequence.
 192    *
 193    * @param accId
 194    * @param alignment
 195    */
 196   protected void addFeaturesAndProduct(String accId, AlignmentI alignment)
 197   {
 198     if (alignment == null)
 199     {
 200       return;
 201     }
 202
 203     try
 204     {
 205       /*
 206        * get 'dummy' genomic sequence with gene, transcript,
 207        * exon, cds and variation features
 208        */
 209       SequenceI genomicSequence = null;
 210       EnsemblFeatures gffFetcher = new EnsemblFeatures(getDomain());
 211       EnsemblFeatureType[] features = getFeaturesToFetch();
 212
 213       // Platform.timeCheck("ESP.getsequencerec1", Platform.TIME_MARK);
 214
 215       AlignmentI geneFeatures = gffFetcher.getSequenceRecords(accId,
 216               features);
 217       if (geneFeatures != null && geneFeatures.getHeight() > 0)
 218       {
 219         genomicSequence = geneFeatures.getSequenceAt(0);
 220       }
 221
 222       // Platform.timeCheck("ESP.getsequencerec2", Platform.TIME_MARK);
 223
 224       if (genomicSequence != null)
 225       {
 226         /*
 227          * transfer features to the query sequence
 228          */
 229         SequenceI querySeq = alignment.findName(accId, true);
 230         if (transferFeatures(accId, genomicSequence, querySeq))
 231         {
 232
 233           /*
 234            * fetch and map protein product, and add it as a cross-reference
 235            * of the retrieved sequence
 236            */
 237           // Platform.timeCheck("ESP.transferFeatures", Platform.TIME_MARK);
 238           addProteinProduct(querySeq);
 239         }
 240       }
 241     } catch (IOException e)
 242     {
 243       System.err.println(
 244               "Error transferring Ensembl features: " + e.getMessage());
 245     }
 246     // Platform.timeCheck("ESP.addfeat done", Platform.TIME_MARK);
 247   }
 248
 249   /**
 250    * Returns those sequence feature types to fetch from Ensembl. We may want
 251    * features either because they are of interest to the user, or as means to
 252    * identify the locations of the sequence on the genomic sequence (CDS
 253    * features identify CDS, exon features identify cDNA etc).
 254    *
 255    * @return
 256    */
 257   protected abstract EnsemblFeatureType[] getFeaturesToFetch();
 258
 259   /**
 260    * Fetches and maps the protein product, and adds it as a cross-reference of
 261    * the retrieved sequence
 262    */
 263   protected void addProteinProduct(SequenceI querySeq)
 264   {
 265     String accId = querySeq.getName();
 266     try
 267     {
 268       System.out.println("Adding protein product for " + accId);
 269       AlignmentI protein = new EnsemblProtein(getDomain())
 270               .getSequenceRecords(accId);
 271       if (protein == null || protein.getHeight() == 0)
 272       {
 273         System.out.println("No protein product found for " + accId);
 274         return;
 275       }
 276       SequenceI proteinSeq = protein.getSequenceAt(0);
 277
 278       /*
 279        * need dataset sequences (to be the subject of mappings)
 280        */
 281       proteinSeq.createDatasetSequence();
 282       querySeq.createDatasetSequence();
 283
 284       MapList mapList = AlignmentUtils.mapCdsToProtein(querySeq,
 285               proteinSeq);
 286       if (mapList != null)
 287       {
 288         // clunky: ensure Uniprot xref if we have one is on mapped sequence
 289         SequenceI ds = proteinSeq.getDatasetSequence();
 290         // TODO: Verify ensp primary ref is on proteinSeq.getDatasetSequence()
 291         Mapping map = new Mapping(ds, mapList);
 292         DBRefEntry dbr = new DBRefEntry(getDbSource(),
 293                 getEnsemblDataVersion(), proteinSeq.getName(), map);
 294         querySeq.getDatasetSequence().addDBRef(dbr);
 295         List<DBRefEntry> uprots = DBRefUtils.selectRefs(ds.getDBRefs(),
 296                 new String[]
 297                 { DBRefSource.UNIPROT });
 298         List<DBRefEntry> upxrefs = DBRefUtils
 299                 .selectRefs(querySeq.getDBRefs(), new String[]
 300                 { DBRefSource.UNIPROT });
 301         if (uprots != null)
 302         {
 303           for (DBRefEntry up : uprots)
 304           {
 305             // locate local uniprot ref and map
 306             List<DBRefEntry> upx = DBRefUtils.searchRefs(upxrefs,
 307                     up.getAccessionId());
 308             DBRefEntry upxref;
 309             if (upx.size() != 0)
 310             {
 311               upxref = upx.get(0);
 312
 313               if (upx.size() > 1)
 314               {
 315                 Console.warn(
 316                         "Implementation issue - multiple uniprot acc on product sequence.");
 317               }
 318             }
 319             else
 320             {
 321               upxref = new DBRefEntry(DBRefSource.UNIPROT,
 322                       getEnsemblDataVersion(), up.getAccessionId());
 323             }
 324
 325             Mapping newMap = new Mapping(ds, mapList);
 326             upxref.setVersion(getEnsemblDataVersion());
 327             upxref.setMap(newMap);
 328             if (upx.size() == 0)
 329             {
 330               // add the new uniprot ref
 331               querySeq.getDatasetSequence().addDBRef(upxref);
 332             }
 333
 334           }
 335         }
 336
 337         /*
 338          * copy exon features to protein, compute peptide variants from dna
 339          * variants and add as features on the protein sequence ta-da
 340          */
 341         // JAL-3187 render on the fly instead
 342         // AlignmentUtils.computeProteinFeatures(querySeq, proteinSeq, mapList);
 343       }
 344     } catch (Exception e)
 345     {
 346       System.err
 347               .println(String.format("Error retrieving protein for %s: %s",
 348                       accId, e.getMessage()));
 349     }
 350   }
 351
 352   /**
 353    * Get database xrefs from Ensembl, and attach them to the sequence
 354    *
 355    * @param seq
 356    */
 357   protected void getCrossReferences(SequenceI seq)
 358   {
 359
 360     // Platform.timeCheck("ESP. getdataseq ", Platform.TIME_MARK);
 361
 362     while (seq.getDatasetSequence() != null)
 363     {
 364       seq = seq.getDatasetSequence();
 365     }
 366
 367     // Platform.timeCheck("ESP. getxref ", Platform.TIME_MARK);
 368
 369     EnsemblXref xrefFetcher = new EnsemblXref(getDomain(), getDbSource(),
 370             getEnsemblDataVersion());
 371     List<DBRefEntry> xrefs = xrefFetcher.getCrossReferences(seq.getName());
 372
 373     for (int i = 0, n = xrefs.size(); i < n; i++)
 374     {
 375       // Platform.timeCheck("ESP. getxref + " + (i) + "/" + n,
 376       // Platform.TIME_MARK);
 377       // BH 2019.01.25 this next method was taking 174 ms PER addition for a
 378       // 266-reference example.
 379       // DBRefUtils.ensurePrimaries(seq)
 380       // was at the end of seq.addDBRef, so executed after ever addition!
 381       // This method was moved to seq.getPrimaryDBRefs()
 382       seq.addDBRef(xrefs.get(i));
 383     }
 384
 385     // System.out.println("primaries are " + seq.getPrimaryDBRefs().toString());
 386     /*
 387      * and add a reference to itself
 388      */
 389
 390     // Platform.timeCheck("ESP. getxref self ", Platform.TIME_MARK);
 391
 392     DBRefEntry self = new DBRefEntry(getDbSource(), getEnsemblDataVersion(),
 393             seq.getName());
 394
 395     // Platform.timeCheck("ESP. getxref self add ", Platform.TIME_MARK);
 396
 397     seq.addDBRef(self);
 398
 399     // Platform.timeCheck("ESP. seqprox done ", Platform.TIME_MARK);
 400   }
 401
 402   /**
 403    * Fetches sequences for the list of accession ids and adds them to the
 404    * alignment. Returns the extended (or created) alignment.
 405    *
 406    * @param ids
 407    * @param alignment
 408    * @return
 409    * @throws JalviewException
 410    * @throws IOException
 411    */
 412   protected AlignmentI fetchSequences(List<String> ids,
 413           AlignmentI alignment) throws JalviewException, IOException
 414   {
 415     if (!isEnsemblAvailable())
 416     {
 417       inProgress = false;
 418       throw new JalviewException("ENSEMBL Rest API not available.");
 419     }
 420     // Platform.timeCheck("EnsemblSeqProx.fetchSeq ", Platform.TIME_MARK);
 421
 422     List<SequenceI> seqs = parseSequenceJson(ids);
 423     if (seqs == null)
 424       return alignment;
 425
 426     if (seqs.isEmpty())
 427     {
 428       throw new IOException("No data returned for " + ids);
 429     }
 430
 431     if (seqs.size() != ids.size())
 432     {
 433       System.out.println(String.format(
 434               "Only retrieved %d sequences for %d query strings",
 435               seqs.size(), ids.size()));
 436     }
 437
 438     if (!seqs.isEmpty())
 439     {
 440       AlignmentI seqal = new Alignment(
 441               seqs.toArray(new SequenceI[seqs.size()]));
 442       for (SequenceI seq : seqs)
 443       {
 444         if (seq.getDescription() == null)
 445         {
 446           seq.setDescription(getDbName());
 447         }
 448         String name = seq.getName();
 449         if (ids.contains(name)
 450                 || ids.contains(name.replace("ENSP", "ENST")))
 451         {
 452           // TODO JAL-3077 use true accession version in dbref
 453           DBRefEntry dbref = DBRefUtils.parseToDbRef(seq, getDbSource(),
 454                   getEnsemblDataVersion(), name);
 455           seq.addDBRef(dbref);
 456         }
 457       }
 458       if (alignment == null)
 459       {
 460         alignment = seqal;
 461       }
 462       else
 463       {
 464         alignment.append(seqal);
 465       }
 466     }
 467     return alignment;
 468   }
 469
 470   /**
 471    * Parses a JSON response for a single sequence ID query
 472    *
 473    * @param br
 474    * @return a single jalview.datamodel.Sequence
 475    * @see http://rest.ensembl.org/documentation/info/sequence_id
 476    */
 477   @SuppressWarnings("unchecked")
 478   protected List<SequenceI> parseSequenceJson(List<String> ids)
 479   {
 480     List<SequenceI> result = new ArrayList<>();
 481     try
 482     {
 483       /*
 484        * for now, assumes only one sequence returned; refactor if needed
 485        * in future to handle a JSONArray with more than one
 486        */
 487       // Platform.timeCheck("ENS seqproxy", Platform.TIME_MARK);
 488       Map<String, Object> val = (Map<String, Object>) getJSON(null, ids, -1,
 489               MODE_MAP, null);
 490       if (val == null)
 491         return null;
 492       Object s = val.get("desc");
 493       String desc = s == null ? null : s.toString();
 494       s = val.get("id");
 495       String id = s == null ? null : s.toString();
 496       s = val.get("seq");
 497       String seq = s == null ? null : s.toString();
 498       Sequence sequence = new Sequence(id, seq);
 499       if (desc != null)
 500       {
 501         sequence.setDescription(desc);
 502       }
 503       // todo JAL-3077 make a DBRefEntry with true accession version
 504       // s = val.get("version");
 505       // String version = s == null ? "0" : s.toString();
 506       // DBRefEntry dbref = new DBRefEntry(getDbSource(), version, id);
 507       // sequence.addDBRef(dbref);
 508       result.add(sequence);
 509     } catch (ParseException | IOException e)
 510     {
 511       System.err.println("Error processing JSON response: " + e.toString());
 512       // ignore
 513     }
 514     // Platform.timeCheck("ENS seqproxy2", Platform.TIME_MARK);
 515     return result;
 516   }
 517
 518   /**
 519    * Returns the URL for the REST call
 520    *
 521    * @return
 522    * @throws MalformedURLException
 523    */
 524   @Override
 525   protected URL getUrl(List<String> ids) throws MalformedURLException
 526   {
 527     /*
 528      * a single id is included in the URL path
 529      * multiple ids go in the POST body instead
 530      */
 531     StringBuffer urlstring = new StringBuffer(128);
 532     urlstring.append(getDomain() + "/sequence/id");
 533     if (ids.size() == 1)
 534     {
 535       urlstring.append("/").append(ids.get(0));
 536     }
 537     // @see https://github.com/Ensembl/ensembl-rest/wiki/Output-formats
 538     urlstring.append("?type=").append(getSourceEnsemblType().getType());
 539     urlstring.append(("&Accept=application/json"));
 540     urlstring.append(("&content-type=application/json"));
 541
 542     String objectType = getObjectType();
 543     if (objectType != null)
 544     {
 545       urlstring.append("&").append(OBJECT_TYPE).append("=")
 546               .append(objectType);
 547     }
 548
 549     URL url = new URL(urlstring.toString());
 550     return url;
 551   }
 552
 553   /**
 554    * Override this method to specify object_type request parameter
 555    *
 556    * @return
 557    */
 558   protected String getObjectType()
 559   {
 560     return null;
 561   }
 562
 563   /**
 564    * A sequence/id POST request currently allows up to 50 queries
 565    *
 566    * @see http://rest.ensembl.org/documentation/info/sequence_id_post
 567    */
 568   @Override
 569   public int getMaximumQueryCount()
 570   {
 571     return 50;
 572   }
 573
 574   @Override
 575   protected boolean useGetRequest()
 576   {
 577     return false;
 578   }
 579
 580   /**
 581    *
 582    * @return the configured sequence return type for this source
 583    */
 584   protected abstract EnsemblSeqType getSourceEnsemblType();
 585
 586   /**
 587    * Returns a list of [start, end] genomic ranges corresponding to the sequence
 588    * being retrieved.
 589    *
 590    * The correspondence between the frames of reference is made by locating
 591    * those features on the genomic sequence which identify the retrieved
 592    * sequence. Specifically
 593    * <ul>
 594    * <li>genomic sequence is identified by "transcript" features with
 595    * ID=transcript:transcriptId</li>
 596    * <li>cdna sequence is identified by "exon" features with
 597    * Parent=transcript:transcriptId</li>
 598    * <li>cds sequence is identified by "CDS" features with
 599    * Parent=transcript:transcriptId</li>
 600    * </ul>
 601    *
 602    * The returned ranges are sorted to run forwards (for positive strand) or
 603    * backwards (for negative strand). Aborts and returns null if both positive
 604    * and negative strand are found (this should not normally happen).
 605    *
 606    * @param sourceSequence
 607    * @param accId
 608    * @param start
 609    *          the start position of the sequence we are mapping to
 610    * @return
 611    */
 612   protected MapList getGenomicRangesFromFeatures(SequenceI sourceSequence,
 613           String accId, int start)
 614   {
 615     List<SequenceFeature> sfs = getIdentifyingFeatures(sourceSequence,
 616             accId);
 617     if (sfs.isEmpty())
 618     {
 619       return null;
 620     }
 621
 622     /*
 623      * generously initial size for number of cds regions
 624      * (worst case titin Q8WZ42 has c. 313 exons)
 625      */
 626     List<int[]> regions = new ArrayList<>(100);
 627     int mappedLength = 0;
 628     int direction = 1; // forward
 629     boolean directionSet = false;
 630
 631     for (SequenceFeature sf : sfs)
 632     {
 633       int strand = sf.getStrand();
 634       strand = strand == 0 ? 1 : strand; // treat unknown as forward
 635
 636       if (directionSet && strand != direction)
 637       {
 638         // abort - mix of forward and backward
 639         System.err
 640                 .println("Error: forward and backward strand for " + accId);
 641         return null;
 642       }
 643       direction = strand;
 644       directionSet = true;
 645
 646       /*
 647        * add to CDS ranges, semi-sorted forwards/backwards
 648        */
 649       if (strand < 0)
 650       {
 651         regions.add(0, new int[] { sf.getEnd(), sf.getBegin() });
 652       }
 653       else
 654       {
 655         regions.add(new int[] { sf.getBegin(), sf.getEnd() });
 656       }
 657       mappedLength += Math.abs(sf.getEnd() - sf.getBegin() + 1);
 658     }
 659
 660     if (regions.isEmpty())
 661     {
 662       System.out.println("Failed to identify target sequence for " + accId
 663               + " from genomic features");
 664       return null;
 665     }
 666
 667     /*
 668      * a final sort is needed since Ensembl returns CDS sorted within source
 669      * (havana / ensembl_havana)
 670      */
 671     Collections.sort(regions, direction == 1 ? IntRangeComparator.ASCENDING
 672             : IntRangeComparator.DESCENDING);
 673
 674     List<int[]> to = Arrays
 675             .asList(new int[]
 676             { start, start + mappedLength - 1 });
 677
 678     return new MapList(regions, to, 1, 1);
 679   }
 680
 681   /**
 682    * Answers a list of sequence features that mark positions of the genomic
 683    * sequence feature which are within the sequence being retrieved. For
 684    * example, an 'exon' feature whose parent is the target transcript marks the
 685    * cdna positions of the transcript. For a gene sequence, this is trivially
 686    * just the 'gene' feature with matching gene id.
 687    *
 688    * @param seq
 689    * @param accId
 690    * @return
 691    */
 692   protected abstract List<SequenceFeature> getIdentifyingFeatures(
 693           SequenceI seq, String accId);
 694
 695   int bhtest = 0;
 696
 697   /**
 698    * Transfers the sequence feature to the target sequence, locating its start
 699    * and end range based on the mapping. Features which do not overlap the
 700    * target sequence are ignored.
 701    *
 702    * @param sf
 703    * @param targetSequence
 704    * @param mapping
 705    *          mapping from the sequence feature's coordinates to the target
 706    *          sequence
 707    * @param forwardStrand
 708    */
 709   protected void transferFeature(SequenceFeature sf,
 710           SequenceI targetSequence, MapList mapping, boolean forwardStrand)
 711   {
 712     int start = sf.getBegin();
 713     int end = sf.getEnd();
 714     int[] mappedRange = mapping.locateInTo(start, end);
 715
 716     if (mappedRange != null)
 717     {
 718       // Platform.timeCheck(null, Platform.TIME_SET);
 719       String group = sf.getFeatureGroup();
 720       if (".".equals(group))
 721       {
 722         group = getDbSource();
 723       }
 724       int newBegin = Math.min(mappedRange[0], mappedRange[1]);
 725       int newEnd = Math.max(mappedRange[0], mappedRange[1]);
 726       // Platform.timeCheck(null, Platform.TIME_MARK);
 727       bhtest++;
 728       // 280 ms/1000 here:
 729       SequenceFeature copy = new SequenceFeature(sf, newBegin, newEnd,
 730               group, sf.getScore());
 731       // 0.175 ms here:
 732       targetSequence.addSequenceFeature(copy);
 733
 734       /*
 735        * for sequence_variant on reverse strand, have to convert the allele
 736        * values to their complements
 737        */
 738       if (!forwardStrand && SequenceOntologyFactory.getInstance()
 739               .isA(sf.getType(), SequenceOntologyI.SEQUENCE_VARIANT))
 740       {
 741         reverseComplementAlleles(copy);
 742       }
 743     }
 744   }
 745
 746   /**
 747    * Change the 'alleles' value of a feature by converting to complementary
 748    * bases, and also update the feature description to match
 749    *
 750    * @param sf
 751    */
 752   static void reverseComplementAlleles(SequenceFeature sf)
 753   {
 754     final String alleles = (String) sf.getValue(Gff3Helper.ALLELES);
 755     if (alleles == null)
 756     {
 757       return;
 758     }
 759     StringBuilder complement = new StringBuilder(alleles.length());
 760     for (String allele : alleles.split(","))
 761     {
 762       reverseComplementAllele(complement, allele);
 763     }
 764     String comp = complement.toString();
 765     sf.setValue(Gff3Helper.ALLELES, comp);
 766     sf.setDescription(comp);
 767   }
 768
 769   /**
 770    * Makes the 'reverse complement' of the given allele and appends it to the
 771    * buffer, after a comma separator if not the first
 772    *
 773    * @param complement
 774    * @param allele
 775    */
 776   static void reverseComplementAllele(StringBuilder complement,
 777           String allele)
 778   {
 779     if (complement.length() > 0)
 780     {
 781       complement.append(",");
 782     }
 783
 784     /*
 785      * some 'alleles' are actually descriptive terms
 786      * e.g. HGMD_MUTATION, PhenCode_variation
 787      * - we don't want to 'reverse complement' these
 788      */
 789     if (!Comparison.isNucleotideSequence(allele, true))
 790     {
 791       complement.append(allele);
 792     }
 793     else
 794     {
 795       for (int i = allele.length() - 1; i >= 0; i--)
 796       {
 797         complement.append(Dna.getComplement(allele.charAt(i)));
 798       }
 799     }
 800   }
 801
 802   /**
 803    * Transfers features from sourceSequence to targetSequence
 804    *
 805    * @param accessionId
 806    * @param sourceSequence
 807    * @param targetSequence
 808    * @return true if any features were transferred, else false
 809    */
 810   protected boolean transferFeatures(String accessionId,
 811           SequenceI sourceSequence, SequenceI targetSequence)
 812   {
 813     if (sourceSequence == null || targetSequence == null)
 814     {
 815       return false;
 816     }
 817
 818     // long start = System.currentTimeMillis();
 819     List<SequenceFeature> sfs = sourceSequence.getFeatures()
 820             .getPositionalFeatures();
 821     MapList mapping = getGenomicRangesFromFeatures(sourceSequence,
 822             accessionId, targetSequence.getStart());
 823     if (mapping == null)
 824     {
 825       return false;
 826     }
 827
 828     // Platform.timeCheck("ESP. xfer " + sfs.size(), Platform.TIME_MARK);
 829
 830     boolean result = transferFeatures(sfs, targetSequence, mapping,
 831             accessionId);
 832     // System.out.println("transferFeatures (" + (sfs.size()) + " --> "
 833     // + targetSequence.getFeatures().getFeatureCount(true) + ") to "
 834     // + targetSequence.getName() + " took "
 835     // + (System.currentTimeMillis() - start) + "ms");
 836     return result;
 837   }
 838
 839   /**
 840    * Transfer features to the target sequence. The start/end positions are
 841    * converted using the mapping. Features which do not overlap are ignored.
 842    * Features whose parent is not the specified identifier are also ignored.
 843    *
 844    * @param sfs
 845    * @param targetSequence
 846    * @param mapping
 847    * @param parentId
 848    * @return
 849    */
 850   protected boolean transferFeatures(List<SequenceFeature> sfs,
 851           SequenceI targetSequence, MapList mapping, String parentId)
 852   {
 853     final boolean forwardStrand = mapping.isFromForwardStrand();
 854
 855     /*
 856      * sort features by start position (which corresponds to end
 857      * position descending if reverse strand) so as to add them in
 858      * 'forwards' order to the target sequence
 859      */
 860     SequenceFeatures.sortFeatures(sfs, forwardStrand);
 861
 862     boolean transferred = false;
 863
 864     for (int i = 0, n = sfs.size(); i < n; i++)
 865     {
 866
 867       // if ((i%1000) == 0) {
 868       //// Platform.timeCheck("Feature " + bhtest, Platform.TIME_GET);
 869       // Platform.timeCheck("ESP. xferFeature + " + (i) + "/" + n,
 870       // Platform.TIME_MARK);
 871       // }
 872
 873       SequenceFeature sf = sfs.get(i);
 874       if (retainFeature(sf, parentId))
 875       {
 876         transferFeature(sf, targetSequence, mapping, forwardStrand);
 877         transferred = true;
 878       }
 879     }
 880
 881     return transferred;
 882   }
 883
 884   /**
 885    * Answers true if the feature type is one we want to keep for the sequence.
 886    * Some features are only retrieved in order to identify the sequence range,
 887    * and may then be discarded as redundant information (e.g. "CDS" feature for
 888    * a CDS sequence).
 889    */
 890   @SuppressWarnings("unused")
 891   protected boolean retainFeature(SequenceFeature sf, String accessionId)
 892   {
 893     return true; // override as required
 894   }
 895
 896   /**
 897    * Answers true if the feature has a Parent which refers to the given
 898    * accession id, or if the feature has no parent. Answers false if the
 899    * feature's Parent is for a different accession id.
 900    *
 901    * @param sf
 902    * @param identifier
 903    * @return
 904    */
 905   protected boolean featureMayBelong(SequenceFeature sf, String identifier)
 906   {
 907     String parent = (String) sf.getValue(PARENT);
 908     if (parent != null && !parent.equalsIgnoreCase(identifier))
 909     {
 910       // this genomic feature belongs to a different transcript
 911       return false;
 912     }
 913     return true;
 914   }
 915
 916   /**
 917    * Answers a short description of the sequence fetcher
 918    */
 919   @Override
 920   public String getDescription()
 921   {
 922     return "Ensembl " + getSourceEnsemblType().getType()
 923             + " sequence with variant features";
 924   }
 925
 926   /**
 927    * Returns a (possibly empty) list of features on the sequence which have the
 928    * specified sequence ontology term (or a sub-type of it), and the given
 929    * identifier as parent
 930    *
 931    * @param sequence
 932    * @param term
 933    * @param parentId
 934    * @return
 935    */
 936   protected List<SequenceFeature> findFeatures(SequenceI sequence,
 937           String term, String parentId)
 938   {
 939     List<SequenceFeature> result = new ArrayList<>();
 940
 941     List<SequenceFeature> sfs = sequence.getFeatures()
 942             .getFeaturesByOntology(term);
 943     for (SequenceFeature sf : sfs)
 944     {
 945       String parent = (String) sf.getValue(PARENT);
 946       if (parent != null && parent.equalsIgnoreCase(parentId))
 947       {
 948         result.add(sf);
 949       }
 950     }
 951
 952     return result;
 953   }
 954
 955   /**
 956    * Answers true if the feature type is either 'NMD_transcript_variant' or
 957    * 'transcript' (or one of its sub-types in the Sequence Ontology). This is
 958    * because NMD_transcript_variant behaves like 'transcript' in Ensembl
 959    * although strictly speaking it is not (it is a sub-type of
 960    * sequence_variant).
 961    * <p>
 962    * (This test was needed when fetching transcript features as GFF. As we are
 963    * now fetching as JSON, all features have type 'transcript' so the check for
 964    * NMD_transcript_variant is redundant. Left in for any future case arising.)
 965    *
 966    * @param featureType
 967    * @return
 968    */
 969   public static boolean isTranscript(String featureType)
 970   {
 971     return SequenceOntologyI.NMD_TRANSCRIPT_VARIANT.equals(featureType)
 972             || SequenceOntologyFactory.getInstance().isA(featureType,
 973                     SequenceOntologyI.TRANSCRIPT);
 974   }
 975 }